Soppdiagnostisk test

Sopp (sopp) er mye funnet i naturen. Selv om omtrent 400 000 arter er beskrevet til dags dato, kan bare 100-150 av dem forårsake infeksjon hos mennesker. Sykdommer forårsaket av sopp kalles mykose. Vitenskapsgrenen som studerer sopp og soppsykdommer kalles mykologi.

Sopp er mikroorganismer med en eukaryot struktur. Siden de ikke inneholder klorofyll, kan de ikke utføre fotosyntese og skiller seg fra planter med denne funksjonen. De er fakultative anaerober eller obligatoriske aerober. Sopp er heterofile mikroorganismer, noe som betyr at de bruker organiske forbindelser som karbon og energikilder. De fordøyer maten ved å frigjøre hydrolytiske enzymer til det ytre miljøet og tar den fordøyde maten inn i cellen ved absorpsjon.

Noen sopp har kapsler og har en polysakkaridstruktur. Kapselpolysakkarid består av minst tre forskjellige polymerer: glukuronoksylomannan, galaktoksylomannan og mannoprotein. Hos sopp består 90 % av celleveggen av polysakkaridpolymerer som kitin, glukan, mannan og kitosan, og 10 % består av proteiner, glykoproteiner og lipider. Type og mengde polysakkarider varierer avhengig av sopparten. Celleveggen gir cellen sin form, beskytter den mot osmotisk sjokk, er antigen og har fysiologisk aktivitet fordi den inneholder noen enzymer. Cellemembranen er en tolagsstruktur sammensatt av fosfolipider, proteiner og steroler, lik pattedyrmembraner. I motsetning til pattedyrmembranen inneholder den ergosterol og zymosterol i stedet for kolesterol. Funksjonene til cellemembranen inkluderer å beskytte cytoplasmaet, regulere stoffutveksling og hjelpe til med kapsel- og veggsyntese. Målstedet for de fleste medisiner fra antifungale gruppe som brukes i dag til terapeutiske formål, er ergosterol, lokalisert i membranen.

Soppsporer er ansvarlige for reproduksjon. Reproduksjon skjer gjennom seksuelle sporer (zygospore, ascospore, basidiospore), aseksuelle sporer (blastospore, arthrospore, chlamydospore, macroconidium, microconidium, sporangiospore) eller paraseksuelle. Den vitenskapelige klassifiseringen av sopp er basert på seksuelle sporer. I henhold til deres morfologiske utseende; Den er delt i to: gjærsopp (Candida, Saccharomyces, etc.) og muggsopp (Ascomycetes, Zygomycetes, Deuteromycetes, etc.).

 

Diagnostiske tester

Isolering og identifikasjon av en lang rekke sopp utføres ved å bruke kulturbaserte og ikke-kulturbaserte (serologiske, molekylære) metoder. Før oppstart av soppdrepende behandling bør kliniske prøver samles under aseptiske forhold, ikke legges i formalin, og leveres til laboratoriet i sterile beholdere med det bærermediet som er best egnet for materialet.

På grunn av lang tid for kulturresultater som skal oppnås, er direkte mikroskopisk evaluering av stor betydning. Kliniske prøver som sendes til laboratoriet vurderes først makroskopisk, og innledende informasjon om tilstedeværelsen av gjær eller mugg innhentes i den mikroskopiske evalueringen. Ved direkte mikroskopisk undersøkelse brukes KOH med en hastighet på 10-20-30 %, vanligvis 30 %. Skrap av hud og negler, fjær, hår, ull, hudstykker osv. KOH tilsettes de oppsamlede materialene for å løse opp kitinlaget og avsløre sopphyfene. For farget mikroskopisk undersøkelse brukes fargestoffer som gramfarging, laktofenol bomullsblått, calcofluor white, India-blekk, Grocott-Gomori mataminforsølv, pyrodic acid-Schiff (PAS), Giemsa, Wright og Mason-Fontana. Woods lys kan også brukes til å søke etter sopp på infiserte overflater. Det er ultrafiolett En stråle som går gjennom et nikkeloksidfilter. Under dette lyset kan noen sopp identifiseres ved å gi farger som blek gul, grønn, gul fluorescens og korallrød fluorescens.

 

Kultur er en mer spesifikk diagnostisk metode enn direkte mikroskopi. Det brukes når en definitiv diagnose ikke kan stilles eller for å bestemme typen sopp. I kulturevaluering er morfologien til koloniene og den resulterende pigmentfargen prioritet. Mediene som brukes varierer avhengig av den kliniske prøven som er tatt. Kulturmedier er delt inn i primære isolasjonsformål og spesifikke formål.

Primære isolasjonsformål;

- Sabauraud-dextrose-agar (SDA) og Brain heart infusion agar (BHI); Den brukes til primær isolering av saprofytiske og patogene sopp. For prøver tatt fra ikke-sterile miljøer brukes SDA og BHI med antibiotika. De formerer seg i løpet av 1-4 uker ved romtemperatur og 37°C og danner kolonier som vanligvis er off-white eller kremfargede, har en myk konsistens og er typisk gjæraktig og stinkende.

-Inhibitor muggagar og Gjærekstrakt fosf. hesteagar; Primær isolering av patogene sopp.

Spesifikke formål;

-Maismelgelé med Tween 80 og trypanblått (MUJ); Chlamydospore diagnose av Candida albicans,

-Bomullsfrø transformasjonsagar; Transformasjon av Blastomyces dermatitidis fra muggfase til gjærfase,

-Czapeks agar; Aspergillus-isolasjon,

 

Fuglefrøagar (Staib-agar); Cryptococcus neoformas isolasjon,

-CHROMagar Candida; Isolering av Candida-arter basert på enzymatisk reaksjonsdannelse,

-Gjærgjæringsbuljong; Fermenteringsegenskaper til gjær,

-Gjærnitrogenagar; Karbohydratassimileringsegenskaper til gjær.

I tillegg akselererer BACTEC- og BacT/Alert-metodene påvisningen av sopp i blodkulturer.

 

Kim -Tube Test; I denne testen søkes det dannelse av kimrør fra celler. En lett suspensjon av gjærlignende mikroorganismer lages i 0,5-1,0 ml sterilt serum og inkuberes ved 37°C i 2-4 timer. En dråpe av blandingen legges på objektglasset og dekkes med et dekkglass. Det undersøkes under mikroskop om kimrøret er dannet fra cellene. Denne situasjonen er karakteristisk for C. albicans.

Tester for å oppdage soppantigener eller metabolitter i serum eller kroppsvæsker er mer verdifulle for den serologiske diagnosen av systemiske soppinfeksjoner. Antistoffer kan påvises ved lateksagglutinasjon (LA), ELISA, Enzyme Immuno Assay (EIA), Radioimmuno Assay (RIA), immunoelektroforese (IE) og immundiffusjon (ID) metoder. Med disse metodene, antigener i cellestrukturen eller metabolitter; mannan, D-arabinitol, (1-3)-β-glukan, polysakkarid glukoroksylomannan, galaktomannan og enolase kan påvises.

Selv om molekylære diagnostiske metoder blir stadig mer populære, kan de brukes som en rutinemetode i alle kliniske klinikker. laboratoriet skyldes økonomiske årsaker og Det er ikke vanlig på grunn av manglende standardisering. Signalamplifikasjonsmetoder ved bruk av nukleinsyreamplifikasjons- og hybridiseringsprober brukes for å oppdage og identifisere smittsomme sopp. Nukleinsyreamplifikasjonsteknologier bruker polymerasekjedereaksjon (PCR) eller lignende metoder. Soppbelastningen er svært lav og dyrking og serologisk diagnose er ennå ikke tilgjengelig. Det kan sies at PCR-baserte diagnostiske metoder vil være mye mer effektive i den utilstrekkelige fasen. Revers transkriptase (RT) PCR tar sikte på å amplifisere mål-RNA.

Les: 0

yodax